Resumen
- El virus C de la leprosis cítrica (CiLV-C), un agente causal de la enfermedad de la leprosis de los cítricos, está presente en América del Sur y Central y es una amenaza para la introducción en la industria de los cítricos de los EE. UU. Se necesita un sistema de detección basado en anticuerpos específico, económico y confiable para la identificación rápida de CiLV-C. El CiLV-C es muy lábil y no se ha purificado en cantidad suficiente para la producción de anticuerpos. El gen p29 del genoma de CiLV-C que codifica la proteína de la cubierta putativa (PCP) fue un codón optimizado para la expresión en Escherichia coli y se sintetizó in vitro. El gen optimizado se subclonó en el vector de expresión bacteriano pDEST17 y se transfirió a células competentes de E. coli BL21AI. La expresión de PCP que contiene la etiqueta His N-terminal se optimizó por inducción con l-arabinosa. Las células inducidas se rompieron por sonicación y la PCP expresada se purificó por cromatografía de afinidad utilizando agarosa Ni-NTA. La PCP expresada purificada se usó luego como un inmunógeno para inyecciones en conejos para producir un anticuerpo policlonal (PAb). El PAb específico para la PCP expresada se identificó mediante transferencia de Western. El anticuerpo se usó con éxito para detectar CiLV-C en los tejidos infectados por CiLV-C sintomáticos utilizando formatos de doble anticuerpo inmunoabsorbente ligado a enzima (DAS-ELISA), ELISA indirecto e inmunoensayo de transferencia puntual (DBIA).