Resumen
- A produção de embriões a partir de fêmeas de alto valor zootécnico pode ser ainda mais eficiente com o resgate de folículos pré-antrais (FOPAs) do ambiente ovariano e posterior armazenamento. Os FOPAs podem ser conservados por meio do resfriamento e/ou criopreservação se mantendo em baixas temperaturas até o momento de sua utilização ou armazenando-os para formação de bancos de germoplasma. No entanto, se sabe que todo processo de criopreservação provoca danos à estrutura celular consequência da formação de espécies reativas ao oxigênio (ROS), o que reforça a necessidade de adicionar antioxidantes ao meio para minimizar o estresse oxidativo. Assim, objetivou-se avaliar o efeito do resfriamento e da associação de crioprotetores penetrantes e não penetrante acrescido de ácido ascórbico na qualidade de folículos pré-antrais bovinos vitrificados. Foram utilizados ovários (n=10) de cinco novilhas mestiças com 14 meses de idade. No laboratório, fragmentos do tecido ovariano foram distribuídos: dois para controle fresco imediatamente processados por isolamento mecânico (zero hora) e o restante resfriados em meio TCM-199+HEPES a 4 ºC nos períodos de quatro e 24 horas e posteriormente vitrificados em quatro tratamentos de criopreservação: T1: TCM-199 + Dimetilsulfoxido (DMSO) 1,5M + Etilenoglicol (EG) 1,5M; T2: TCM-199 + DMSO 1,5M + EG 1,5M + sacarose (SAC) 0,5M; T3: TCM-199 + DMSO 1,5M + EG 1,5M + Ácido Ascórbico (AA) 0,1 mM e T4: TCM-199 + DMSO 1,5M + EG 1,5M + SAC 0,5M + AA 0,1mM. Após a desvitrificação (aquecimento e remoção dos crioprotetores), os fragmentos ovarianos foram isolados mecanicamente com TCM-199 e 10 % de BSA e em seguida analisada a viabilidade dos FOPAs por meio da coloração de azul de Trypan. As variáveis foram submetidas ao teste de Qui-quadrado a 5% de probabilidade ou ao Teste Exato de Fisher. O resfriamento dos FOPAs por quatro e 24 horas reduziu (P<0,01) a porcentagem de folículos viáveis (78,7 e 74 %, respectivamente) em relação aos folículos do grupo controle (94 %), esta redução foi provavelmente causada pela manipulação dos FOPAs, em que a separação das células pode aumentar injurias nas estruturas, no entanto, não foram observadas diferenças (P>0,05) na porcentagem de folículos a 4 °C entre os dois períodos de resfriamento. Após vitrificação revelou-se que somente os tratamentos contendo DMSO, EG e AA foram capazes de manter uma percentagem de folículos viáveis semelhante ao controle 24 h (66 e 74 %, respectivamente; P>0,05), isto ratifica a importância do agente antioxidante na preservação das membranas celulares e sobrevivência de FOPAs. Conclui-se que FOPAs são conservados eficientemente a 4 ºC e que a associação de crioprotetores com o antioxidante AA melhora as taxas de sobrevivência e viabilidade durante a vitrificação. Figueiredo JR. Manipulação de Oócitos Inclusos em Folículos Ovarianos Pré-antrais. Biotécnicas Aplicadas à Reprodução Animal.