O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da suplementação com glicerina bruta na dieta de novilhos Nelore sobre os índices de riqueza e diversidade bacteriana ruminal. Foram utilizados quatro novilhos Nelore distribuídos em um duplo quadrado latino 2 x 2 balanceado para efeito residual. As dietas continham concentrado com 10% (Glicerina) ou sem glicerina (Controle). A amplificação da região hipervariável V4 a V5 do gene 16S rRNA bacteriano realizou-se mediante uma reação de PCR utilizando-se o primer forward 515F e o reverse 926R. Após purificação o produto foi quantificado por Fluorometria e as amostras de cada tratamento foram unidas equimolarmente e enviados para sequenciamento no Ion Personal Genome Machine (PGM, Ion Torrent/Life Technologies) ao Departamento de Tecnologia da Unesp/ FCAV. Com os dados de sequenciamento foi construída uma matriz triangular e no programa Mothur foram calculados os estimadores de riqueza Chao1 e ACE e os índices de diversidade Shannon-Weaver e Simpson, tendo como referência para a classificação filogenética das reads o banco de dados SILVA. A dieta com adição de glicerina apresentou maior índice de riqueza e de diversidade em todos os níveis de similaridade. Por outro lado, os valores mínimos de riqueza e diversidade foram encontrados no nível de similaridade de 95% para o índice de Shannon-Wiener e 97% para o índice de Simpson ambos dentro do tratamento controle. A suplementação com 10% de glicerina bruta na dieta de bovinos Nelore pode aumentar os índices de diversidade e riqueza bacteriana ruminal.